Разлика између екстракције ДНК и РНК

Кључна разлика - ДНК вс РНА екстракција
 

Проучавање ДНК и РНК су витални аспекти за разумевање основних концепата молекуларне биологије, биотехнологије и генетике. Екстракција чистих ДНК и РНА узорака је неопходна да би се спровеле експерименталне процедуре током ових студија. Кључна разлика између екстракције ДНК и РНК је та Процес екстракције ДНК прочишћава ДНК, док екстракција РНК пречишћава РНК. Процес екстракције ДНК има три различита корака: лиза ћелије и катаболизам мембранских липида и протеина, накупљање катаболита концентрованим раствором соли и таложење ДНК са етанолом. Поступак у три корака може се састојати од два необвезна корака. Процес пречишћавања РНА састоји се од четири различита корака: додавање гванијум-тиоцијаната за лизу ћелије, денатурација протеина укључујући рибонуклеазе, одвајање РНА додатком хлороформа и фенола и испирање преципитата коришћењем етанола.

САДРЖАЈ

1. Преглед и кључне разлике
2. Шта је екстракција ДНК
3. Шта је РНА екстракција
4. Сличности између екстракције ДНК и РНК
5. Упоредно упоређивање - екстракција ДНК и РНК у табеларном облику
6. Резиме

Шта је ДНК екстракција?

Екстракција ДНК је физички и хемијски процес који се користи за пречишћавање ДНК из узорка. Екстракција ДНК важан је аспект у контексту молекуларне биологије и форензичких наука. Процес је у три основна корака. У почетку би требало да се прикупе ћелије које су заинтересоване. Затим се олакшава лиза ћелије да би се разбила ћелијска мембрана, која ћелија отвара и открива цитоплазму заједно са ДНК. Сурфактанти или други детерџенти могу се користити за лизирање липида из ћелијске мембране док се присутни протеини катаболишу протеазама. Ово је факултативни корак. Једном када се ћелија лизира, накупљање катаболизованих молекула је омогућено концентрованим растворима соли. Након тога следи центрифугирање раствора који одваја накупине отпада од ДНК. У овој фази, диференцирана ДНК се меша са реагенсима и солима коришћеним током ћелијског циклуса.

Слика 01: Екстракција ДНК

Да би се даље прочистило, могли би се користити следећи кораци. Један од метода је таложење етанолом, које укључује мешање ледено хладног етанола са одвојеним узорком ДНК. ДНК је нерастворљив у алкохолу и на тај начин ствара пелет захваљујући накупљању молекула ДНК заједно. У овај поступак се додаје натријум ацетат како би се повећао степен таложења повећавањем јонске снаге. Поред процеса таложења етанола, за то се може подстаћи и поступак екстракције феноло-хлороформа. У овој методи, фенол денатура протеине присутне у узорку. Једном центрифугирани, денатурирани протеини ће остати у органској фази док ће молекули ДНК који су помешани са хлороформом бити присутни у воденој фази. Хлороформ ће уклонити остатке фенола. Једном када је екстракција завршена, ДНК се раствара у ТЕ пуферу или ултра чистој води.

Шта је РНА екстракција?

Пречишћавање РНК је процес којим се РНА пречишћава из биолошког узорка. Због присуства рибонуклеазе у ћелијама и ткивима, овај процес је компликован. Ензим рибонуклеаза има способност да брзо разгради РНА. Хемијска природа рибонуклеаза је изузетно стабилна и тешко их је инактивирати. Неутрализација рибонуклеаза је опција. Пошто је овај ензим свеприсутан у ћелијама и ткивима, развијене су посебне технике за екстракцију РНА. Од многих метода, најчешћа метода је екстракција гванидинијум-тиоцинат-фено-хлороформа.

Слика 02: Екстракција РНА

Метода екстракције гванидинијум-тиоцијаната-фено-хлороформа зависи од центрифугирања и одвајања фаза. Смеша која ће се центрифугирати састоји се од воденог узорка и воденог засићеног раствора који се састоји од фенола и хлороформа. Једном центрифугирано, раствор се састоји од горње водене фазе и доње органске фазе у неутралним условима пХ (пХ 7-8). РНА је присутна у воденој фази. Органска фаза се обично састоји од протеина растворених у фенолу и липида растворених у хлороформу. Додаје се хаотропно средство (молекул који има способност да разбија водикове везе између молекула воде); ово је познато као гванидинијум тиоцијанат. Ово средство има способност денатурирања протеина који укључују рибонуклеазе које могу разградити РНК и укључене су у лизу ћелије. Такође раздваја рРНА од рибосомалних протеина. Завршни корак пречишћавања РНА је испирање талога водене фазе етанолом. РНК се такође може пречистити коришћењем течног азота.

Које су сличности између екстракције ДНК и РНК?

• Оба поступка екстракције користе штетне хемикалије попут фенола и хлороформа.
• Центрифугирање је суштинска техника за оба процеса.
• Етанол се користи за испирање талога и добијање прочишћене ДНК или РНК.

Која је разлика између екстракције ДНК и РНК?

ДНК вс РНА екстракција
Екстракција ДНК је процес који извлачи ДНК из организма или узорка.	Екстракција РНК је поступак који РНА издваја из узорка.
Кораци
Процес екстракције ДНК састоји се од три различита корака са два необвезна корака.	Процес екстракције РНА састоји се од четири различита корака.
Реагенси
Сурфактанти, протеазе (необавезно), алкохол, хлороформ, фенол, натријум ацетат користе се за екстракцију ДНК.	За екстракцију РНА користе се гванијум-тиоцијанат, хлороформ, фенол, етанол.

Преглед - ДНК вс РНА екстракција

Екстракција ДНК и РНК су витални аспекти експерименталних поступака за проучавање молекуларне биологије, генетике и биотехнологије. Оба поступка укључују сличне реагенсе, али екстракција РНА користи посебан реагенс познат као гванидиов тиоцијанат који смањује активност рибонуклеазе. Ово је главна разлика између екстракције ДНК и РНК.

Преузмите ПДФ верзију ДНК вс РНА екстракцију

Можете преузети ПДФ верзију овог чланка и користити је за оффлине употребу према напомени. Молимо преузмите ПДФ верзију овде. Разлика између ДНК и РНА екстракције

Референце:

1. Цхомцзински, П и Н Саццхи. „Метода једноструког изоловања РНК киселином гванидинијум тиоцијанат-екстракцијом фенол-хлороформа.“ Аналитичка биохемија., Америчка национална медицинска библиотека, апр. 1987, доступно овде. Приступљено 31. августа 2017
2. Хиндави. "ДНК, РНА и екстракција протеина: прошлост и садашњост." БиоМед Ресеарцх Интернатионал, Хиндави, 30. новембра 2009., доступно овде. Приступљено 31. августа 2017.

Љубазношћу слике:

1. „ДНК издвојен из авокада“ Мике Сеифанг - првобитно објављен у Флицкр-у као успех (ЦЦ БИ 2.0) преко Цоммонс Викимедиа
2. „Извлачење ПхОХ-ЦХЦл3“ Скуидониус (разговор) - Властито дело (Оригинални текст: самостално направљен) (Публиц Домаин) преко Цоммонс Викимедиа