Разлика између северног јужног и западног флека

Кључна разлика - Северни против Јужни вс Западни Блоттинг

Откривање специфичних секвенци ДНК, РНА и протеина је од суштинске важности за различите врсте студија у молекуларној биологији. Гел електрофореза је техника која одваја ДНК, РНК и протеине према њиховој величини. Из профила гела, посебна ДНК секвенца, РНА секвенца или протеин се откривају посебним техникама које се називају блоттинг и хибридизација са обележеним сондама. Постоје три различите врсте натапања, и то јужно, северно и западно. Кључна разлика између северног јужног и западног мрља лежи у врсти молекула који открије из узорка. Соутхерн блоттинг је метода која детектује специфичну секвенцу ДНК из узорка ДНК. Нортхерн блоттинг је техника која детектује специфичну РНА секвенцу из РНА узорка. Вестерн блоттинг је метода која детектује одређени протеин из узорка протеина.

САДРЖАЈ
1. Преглед и кључне разлике
2. Шта је јужни блотинг
3. Шта је Северни блотинг
4. Шта је Вестерн Блоттинг
5. Упоредно упоређивање - Северни против Јужног против Западног Блатовања
6. Резиме

Шта је јужни блотинг?

Технику јужног мрља развио је Е. М. Соутхерн 1975. за идентификацију специфичне секвенце ДНК из узорка ДНК. Ово је прва техника пескања која је уведена у молекуларну биологију. Омогућила је детекцију специфичних гена из ДНК-а, специфичних фрагмената из ДНК-а, итд. Постоји неколико корака који се користе у техници јужења. Они су како слиједи.

ДНК је изолована из узорка и пробављена рестрикцијским ендонуклеазама.
Дигестирани узорак одваја се електрофорезом гела Агаросе.
Фрагменти ДНК у гелу денатурирају се у појединачне нити употребом алкалног раствора.
Једноланчана ДНК се преноси капиларним преносом на нитроцелулозну филтерску мембрану.
Пренесена ДНК се трајно фиксира на мембрану.
Фиксна ДНК на мембрани хибридизирана је обележеним сондама.
Невезана ДНК испере се са мембране.
Рендгенски филм је изложен мембрани и припремљен је ауторадиограф.

Јужни блот се примењује за различите аспекте молекуларне биологије. Корисна је у РФЛП мапирању, форензичким студијама, метилацији ДНК у експресији гена, детекцији мутираних гена у генетским поремећајима, отиску прста ДНК, итд..

Слика 01: Техника јужног пјескарења

Шта је Северни блотинг?

Нортхерн блоттинг је метода дизајнирана за откривање специфичне РНА секвенце или мРНА секвенце из узорка за проучавање експресије гена. Ову технику су развили Алвине, Кемп и Старк 1979. године. Она се разликује од јужне и западне технике брисања због неколико корака. Међутим, ова се техника изводи и гел електрофорезом, блотирањем и хибридизацијом са специфичним обележеним сондама и детекцијом. Техника северног брисања изводи се на следећи начин.

РНА се екстрахује из узорка и одвоји гел-електрофорезом.
РНА се преноси из гела на блоттинг мембрану и фиксира.
Мембрана је третирана обележена сондом припремљеном од цДНА или РНА (сонда је комплементарна одређеној секвенци у узорку).
Сонда се инкубира са мембраном да се веже за одређену секвенцу.
Невезане сонде се исперу.
Хибридизирани фрагменти детектирају се ауторадиографом.

Сјеверно мрље је важно средство у откривању и квантификацији хибридизиране мРНА, проучавању деградације РНА, процјени полуживота РНА, детекцији спајања РНА, проучавању експресије гена итд..

Слика 02: Северни блотинг

Шта је Вестерн Блоттинг?

Вестерн блоттинг је метода детекције специфичног протеина из протеинске смеше коришћењем обележених антитела. Стога је и западна мрља позната и као имуноблот. Ову технику је увео Товбин ет ал 1979. године и сада се рутински изводи у лабораторијама за анализу протеина. Кораци су следећи.

Протеини се издвајају из узорка
Протеини су раздвојени по величини помоћу електрофорезе полиакриламидног гела
Одвојени молекули се електропорацијом преносе у ПВДФ мембрану или нитроцелулозну мембрану
Мембрана је блокирана због неспецифичног везања са антителом
Пренесени протеини се везују за примарна антитела (антитела обележена ензимом).
Мембрана се испере ради уклањања неспецифично везаних примарних антитела
Везана антитела се детектују додавањем супстрата и детекцијом обојеног талога који се формира

Вестерн блот је користан за откривање анти-ХИВ антитела у узорку људског серума. Вестерн блот се такође може користити као потврдни тест за инфекцију хепатитисом Б и дефинитивни тест за болест луде краве.

Слика 03: Вестерн блотинг

Која је разлика између северног јужног и западног флека?

Северни вс Јужни вс Западни Блоттинг
Врста детектиране молекуле
Нортхерн Блоттинг	Нортхерн блоттинг открива специфичну РНА секвенцу из РНА узорка.
Соутхерн Блоттинг	Соутхерн блоттинг открива специфичну секвенцу ДНК из ДНК узорка.
Вестерн блоттинг	Вестерн блоттинг открива специфичан протеин из узорка протеина.
Тип гела
Нортхерн Блоттинг	Овде се користи агароза / формалдехидни гел.
Соутхерн Блоттинг	Овде се користи Агаросе гел.
Вестерн блоттинг	За то се користи полиакриламидни гел.
Метода брисања
Нортхерн Блоттинг	Ово је капиларни трансфер.
Соутхерн Блоттинг	Ово је капиларни трансфер.
Вестерн блоттинг	Ово је електрични пренос.
Користе се сонде
Нортхерн Блоттинг	цДНА или РНА сонде означене радиоактивно или нерадиоактивно.
Соутхерн Блоттинг	ДНК сонде су означене радиоактивно или нерадиоактивно.
Вестерн блоттинг	Примарна антитела се користе као сонде.
Систем детекције
Нортхерн Блоттинг	То се ради помоћу ауторадиографа или детекције светлости или промене боје.
Соутхерн Блоттинг	То се ради помоћу ауторадиографа, детекције светлости или промене боје.
Вестерн блоттинг	То се постиже детекцијом светлости или промене боје.

Преглед - Северни и Јужни вс Западни Блоттинг

Пљескавица је посебна техника развијена за идентификацију специфичне ДНК, РНК или протеина из узорака. Постоје три одвојена поступка брисања, наиме северна, јужна и западна, како би се открио одређени тип молекула. Техника северног блотирања дизајнирана је тако да детектује специфичну РНК секвенцу из смеше РНА. Техника јужног упијања омогућава откривање специфичне секвенце ДНК из узорка ДНК, а техника западног упијања развијена је за идентификацију специфичног протеина из протеинске мешавине.

Референце
1. Гиббонс, Јанаи. „Вестерн Блот: Преглед преноса протеина.“ Нортх Америцан Јоурнал оф Медицал Сциенцес. Медкнов Публицатионс & Медиа Пвт Лтд, мар. 2014. Веб. 27. март 2017
2. Бровн, Т. „Јужна мрља“. Актуелни протоколи у имунологији. Америчка национална медицинска библиотека, мај 2001. Веб. 27. март 2017
3. Хе, Схан Л. "Северна мрља." Методе у ензимологији. Америчка национална медицинска библиотека, 2013. Веб. 27. март 2017

Љубазношћу слике:
1. „Северна шема шема“ РНА405 - Властито дело (Публиц Домаин) преко Цоммонс Викимедиа
2. "Вестерн блот 114А" написао Амантхабагдон - сопствени рад (Публиц Домаин) преко Цоммонс Викимедиа

Наука и природа