ДНК полимераза је ензим који ствара нову ДНК из својих грађевних блокова (нуклеотида). Код прокариота и еукариота пронађене су различите врсте ДНК полимераза. Умножавање ДНК је изводљиво због присуства ових посебних ензима, а генетска информација се дејством ДНК полимераза преноси потомству. Так полимераза је посебна врста ДНК полимеразе која је термостабилна и широко се користи у ПЦР-у. Так полимераза се налази у термофилним бактеријама и пречишћена је у њима ин витро ДНК репликација. Тхе кључна разлика између Так полимеразе и ДНК полимеразе је то Так полимераза може издржати високе температуре без денатурирања, док се друге ДНК полимеразе денатурају на високим температурама (на разградњи протеина).
САДРЖАЈ
1. Преглед и кључне разлике
2. Шта је Так полимераза
3. Шта је ДНК полимераза
4. Упоредна упоредба - Так полимераза вс ДНК полимераза
5. Резиме
Так полимераза (Так ДНА полимераза) је ензим који се користи за синтезу ДНК ин витро ПЦР техником. Производи га термофилна бактерија звана Тхермус акуатицус која живи у топлим изворима и термалним отворима. Так полимераза је термостабилни ензим који се не разграђује на високим температурама. Так полимераза је пречишћена први пут и објављена у Цхиен-у ет ал. 1976. ПЦР техника изведена је уз помоћ Так полимеразе због њене способности да подноси колебање великих температура и температуре током ПЦР-а. Так полимераза катализира синтезу ДНК када постоје прајмери, нуклеотиди и једноланчани шаблонски ДНК. Ензим се састоји од једног полипептида молекулске тежине од око 94 кДа. Так полимераза показује своју оптималну активност на 80 ° Ц и у распону пХ 7 - 8 уз присуство магнезијумових јона. Има и полимеразну и ексонуклеазну активност. Ензим је сачињен од једног полипептидног ланца, а ген за Так полимеразу садржи висок садржај Г и Ц (67,9%).
Термостабилна Так полимераза омогућава извођење ПЦР-а на високим температурама које повећавају специфичност прајмера и смањују стварање нежељених ПЦР производа (темељних димера). Так полимераза такође елиминише потребу за додавањем нових ензима у ПЦР реакцију после сваког ПЦР реакцијског циклуса због његове способности да издржи високе температуре. Откривање Так полимеразе омогућило је да се ПЦР изводи у једној затвореној епрувети на релативно једноставној машини. Због ових својстава Так полимеразе, ПЦР постаје популарна рутински изведена лабораторијска техника у многим анализама молекуларне биологије у вези са ДНК анализом.
Так полимераза се широко користи у молекуларно-биолошким техникама, и постоји потреба за великом производњом Так полимеразе. Због тога, коришћењем рекомбинантне ДНК технологије и клонирања гена, ген који је кодирао Так ДНК полимеразу је клониран и експримиран у Есцхерицхиа цоли. То је увелико олакшало производњу рекомбинантне Так полимеразе и смањило цену овог ензима за адекватну употребу.
Слика 1: Так полимераза
ДНК полимераза је ензим који катализује синтезу ДНК из нуклеотида. То је најтачнији ензим одговоран за умножавање генома и преношење генетских информација потомцима. Током деобе ћелија, ДНК полимераза дуплира сву своју ДНК и преноси једну копију свакој ћерки ћелији. 1955. код Артхура Корнберга откривена је ДНК полимераза у Е Цоли. Функција ДНК полимеразе зависи од неколико захтева; шаблона ДНК, Мг+2 јони, све четири врсте деоксинуклеотида (дАТП, дТТП, дЦТП и д ГТП), и кратка секвенца РНА (прајмер). Синтеза ДНК се врши у правцу 5'то 3 'ДНК полимеразом.
ДНК полимеразе могу се груписати у седам различитих породица: А, Б, Ц, Д, Кс, И и РТ (реверзна транскриптаза). Ретровирузи кодирају за РТ; необична ДНК полимераза којој је потребна РНА шаблона за синтезу ДНК. Постоји пет различитих врста ДНК полимераза које се налазе у прокариотима за различите улоге у репликацији ДНК. ДНК полимераза 3 одговорна је за полимеризацију новог ланца ДНК. ДНК полимераза 1 одговорна је за поправљање и крпљење ДНК. ДНК полимеразе 2, 4 и 5 одговорне су за поправак и корекцију ДНК. У еукариотама постоји 15 различитих врста ДНК полимераза. Они укључују пет главних породица.
Слика 2: ДНК полимераза
ДНК полимеразе се користе у клонирању гена, ПЦР, секвенцирању ДНК, детекцији СНП-а, молекуларној дијагностици, итд. Так полимераза је једна врста ДНК полимеразе која може да поднесе високе температуре и буде доступна за синтезу ДНК без деградације.
Так Полимераза вс ДНК Полимераза | |
Так ДНК полимераза је ензим који ствара ДНК. То је термостабилни ензим који се налази у термофилима | ДНК полимераза је ензим који олакшава репликацију ДНК и налази се у прокариотским и еукариотским организмима. |
Деградација на високим температурама | |
Так полимераза је активна на високим температурама. | ДНК полимераза се разграђује на денатурацији протеина високих температура. |
Употреба | |
Ово се широко користи у ПЦР-у | Так полимераза је заменила дНА полимеразу из цоли првобитно коришћен у ПЦР. |
ДНК полимеразе су ензими који синтетишу ДНК из деоксинуклеотида (градивних блокова ДНК) када су шаблон и прајмери доступни. Потребне су ДНК полимеразе да би дуплирале ДНК ћелије и прешле у идентичне ћелијске ћелије током деобе ћелија. ДНК полимеразе додају нове нуклеотиде на 3 'крај прајмера и продужују синтезу нове вериге ДНК у правцу 5' до 3 '. Так ДНА полимераза је један од ензима ДНК полимеразе који је веома користан у методи ланчане реакције полимеразом (ПЦР) у начину амплификације ДНК. Е. цоли ДНК полимераза 1 раније се користила за ПЦР, али комерцијална Так полимераза је то заменила због високе специфичности везивања прајмера на повишеним температурама и стварања већег приноса жељеног производа са мање неспецифичног производа за амплификацију. Ово је разлика између Так полимеразе и ДНК полимеразе.
Референце:
1.Исхино, Соноко и Иосхизуми Исхино. „ДНК полимеразе као корисни реагенси за биотехнологију - историја развојних истраживања на овом пољу.“ Границе у микробиологији. Фронтиерс Медиа С.А., 2014. Веб. 28. фебруар 2017
2 "Так и друге термостабилне ДНК полимеразе." Спрингер, Спрингер Холандија, 01. јануара 1970. Веб, 28 фебруара 2017
3.Стиллман, Бруце. "ДНК полимеразе на репликацији у еукариотама." Молекуларна ћелија. Америчка национална медицинска библиотека, 09. мај 2008. Веб. 28. фебруар 2017
4.ЕукариотскеДНАПолимеризе - Универзитет у Окфорду. “ Н.п., н.д. Веб. 28. фебруар 2017
Љубазношћу слике:
1. „Так“ Аденосине - сопствени рад (ЦЦ БИ-СА 3.0) преко Цоммонс Викимедиа
2. „ДНК полимераза“ од Иикразуул - сопствени рад (ЦЦ БИ-СА 3.0) преко Цоммонс Викимедиа