Разлика између топле и хладне трипсинизије

Кључна разлика - топло вс Хладно Трипсинизатион
 

Топла и хладна трипсинизам су две методе које се користе у ензимској рашчлањивању ћелија у култивацији животињских ћелија. Тхе кључна разлика између топле и хладне трипсинизије, као што називи сугеришу, зависи од температуре на којој се трипсин додаје за ћелијску раздвајање. Топла триппсинизација се одвија у условима више температуре (36.5 - 37) ⁰Ц) будући да се хладна трипсинизација одвија у условима ниских температура.

Током процеса примарног култивације животињских ћелија, коришћене су три главне методе и показале су се успешнима. Три поступка укључују механичку рашчлањивање ћелија, ензимску рашчлањивање ћелија и примарну технику експлантације. Ензимска рашчлањивање ћелија што доводи до изолације ћелија, а врши се ензимом трипсином који разграђује протеин. Стога је овај процес познат и као триппсинизација. Трипсинизација се може обавити под два различита услова, а то је топла триппсинизација и хладна трипсинизма. Топла триппсинизација је поступак третирања ћелија трипсином у топлим условима на температури од 36,5 - 37 ⁰Ц. Хладна трипсинизација је поступак третирања трипсином који се одвија у хладнијим условима, пожељно на леду одржавајући веома ниске температуре.

САДРЖАЈ

1. Преглед и кључне разлике
2. Шта је топла триппсинизација
3. Шта је хладна трипсинизација
4. Сличности између топле и хладне трипсинизије
5. Упоредно упоређивање - Топла вс хладна трипсина у табеларном облику
6. Резиме

Шта је топла триппсинизација?

Трипсинизација се може обавити ради раздвајања ћелијских компоненти да би се изоловале ћелије да би се произвела примарна ћелијска култура. Трипсин је ензим за разградњу протеина, а ензимска мешавина која се користи у трипсинизацији може бити или сирови екстракт или пречишћени производ. Сматра се да је сирови екстракт ефикаснији у лизи протеина и разградњи ћелија јер садржи остале разградне ензиме.

Топла триппсинизација је најчешће коришћена ензиматска метода за рашчлањивање ћелија која се одвија под условима више температуре. Пре третмана трипсинизацијом, жељено ткиво сеце на мање комаде. То олакшава процес рашчлањивања. Уситњено ткиво се затим испере у посебном медијуму познатом као медијум базалне соли за дисекцију.

По завршетку корака прања, ћелије се трансформишу у тиквицу која садржи активни ензим, који је трипсин. Пошто ова техника подразумева топли протокол трипсинизације, трипсин се поставља на температуру од око 37 ⁰Ц око четири сата.

Слика 01: Трипсин

Садржај се меша и агитира коришћењем метода центрифугирања ради лакоће протокола и за убрзавање процеса раздвајања. Једном када се постигне препоручено време, ћелије се могу добити из супернатанта. Ћелије добијене из супернатанта се затим инкубирају на одређеној температури и времену.

Шта је хладна трипсинизација?

Хладна трипсинизам је друга врста трипсинизације која се одвија у хладним условима. У овој техници, ћелије које су исецкане и испране постављају се у бочице на леду и затим натапају трипсином. Период намакања је много дужи - око 6 - 24 сата.

Након завршетка поступка намакања, трипсин се уклања из ћелијског лизата, а комадићи ткива се даље инкубирају на 37 ⁰Ц око 20 - 30 минута. Расклапање ћелија настаје понављаним пипетирањем мешавине ткива. Ово ће омогућити ћелијама да се дисоцирају од мембране и дођу до супернатанта. Једном када су ћелије у супернатанту, инкубирају се и узгајају на жељеној температури и временском периоду.

Метода хладне трипсине има неколико предности

• Већи принос одрживих ћелија јер је оштећење ћелије сведено на минимум. Оштећење ћелија је сведено на минимум коришћењем корака центрифугирања.
• Веома повољан метод.
• Мање напорно.

Главно ограничење методе хладне трипсине је да се велике количине не могу користити у једном случају.

Које су сличности између топле и хладне трипсинизије?

• И топли и хладни поступци триппсинизације користе ензим трипсин за разградњу ћелија.
• И поступци топле и хладне трипсине користе се у поступцима ћелијске културе за раздвајање ћелија.
• И у поступцима третмана топлом и хладном трипсинизмом ћелије су добијене из супернатанта.

Која је разлика између топле и хладне трипсинизације?

Топла вс хладна трипсинизација
Топла триппсинизација је поступак третирања ћелија трипсином у топлим условима на температури од 36,5 - 37 0.	Хладна трипсинизација је поступак третирања трипсином који се одвија у хладнијим условима, пожељно на леду одржавајући веома ниске температуре.
Протокол
Комадићи уситњеног ткива одржавају се на 37 ° 0Ц континуирано током целог поступка.	Комадићи уситњеног ткива се у почетку одржавају на хладним температурама, а затим одржавају на 37 0.
Температура
Топла трипсинизација се јавља у 36.5 - 37 0	Хладна трипсинизација се дешава на ледено хладним температурама.
Време потрошено
Мање времена потребног за цео процес (око 4 сата) топле триппинизације.	Дуже време потребно (око 6 - 24 сата) за хладну трипсинизацију.
Принос одрживих ћелија
Са ниском топлом трипсинизмом.	Висока у хладној трипсинизацији.
Употреба центрифугирања
Центрифуга је потребна за рашчлањивање ћелија у топлој трипсинизацији.	Центрифуга није потребна у хладној трипсинизацији.
Почетна количина ткива за трипсинизацију
Већа количина ткива може се користити у топлој трипсинизацији.	Мања количина ткива може се користити у хладној трипсинизацији.
Оштећења ћелија
Висок захваљујући центрифугирању у топлој трипсинизацији.	Мање због хладне триппинизације.

Резиме - Варм вс Хладно Трипсинизатион

Трипсинизација је метода употребе ензима разградње протеина трипсин за разградњу и припрему примарних ћелијских култура током процеса култивације ћелије. Постоје две главне технике трипсинизације на основу температура коришћених током поступка. Топла и хладна трипсинизам. Топла триппсинизација се врши на 37 ⁰Ц будући да се хладна трипсинизација врши у ледено хладним условима. Иако је хладна трипсинизација потребна дуже време за завршетак, каже се да има већи принос одрживих ћелија. То је због чињенице да је оштећење ћелија сведено на минимум у хладној трипсинизацији јер се не користе снажни кораци центрифугирања. То је разлика између топле и хладне трипсинизије.

Референце:

1. "Трипсинизатион". Трипсинизатион - преглед | СциенцеДирецт теме. Доступно овде 
2. "Примарна ћелијска култура: 3 технике (са дијаграмом)." Дискусија о биологији, 16. октобра 2015. Доступно овде  

Љубазношћу слике:

1. 'Трипсин активна локација' од Фдардел - Властити рад, (ЦЦ БИ-СА 3.0) преко Цоммонс Викимедиа