Клонирање ДНК је важан процес који омогућава размножавање важних фрагмената ДНК у организмима. Потребно је спајање специфичне ДНК са векторском ДНК да би се створила рекомбинантна ДНК која се трансформише у организам домаћина. Вектор је молекул ДНК који се понаша као средство за преношење страног генетског материјала у другу ћелију или организам. Требао би бити у стању да се реплицира у организму домаћина и произведе вишеструких копија рекомбинантне ДНК. Постоје различите врсте вектора који се користе у клонирању ДНК. Вештачки хромосом квасца (ИАЦ) и фазни вектор М13 су две врсте. Кључна разлика између ИАЦ и М13 фаг вектора је та ИАЦ је вештачки хромозом који се размножава у ћелијама квасца док Фактор вектора М13 је једноланчана кружна ДНК бактериофага М13 која се реплицира у Е Цоли ћелије.
САДРЖАЈ
1. Преглед и кључне разлике
2. Шта је ИАЦ
3. Шта је М13 Пхаге Вецтор
4. Упоредна упоредба - ИАЦ и М13 Пхаге Вецтор
5. Резиме
ИАЦ је вештачки изграђен хромозом који има способност да носи велики сегмент страних ДНК и да се реплицира унутар ћелија квасца. Има центромере, теломере и аутономно реплицирајуће секвенце неопходне за репликацију и стабилност. ИАЦ такође треба да носи селективни маркер или маркере и места рестрикције како би га учинио ефикасним вектором клонирања. Велике секвенце у распону од 1000 кб до 2000 кб могу се убацити у ИАЦ и пренети у квас.
Слика 01: ИАЦ Вецтор
Бактериофаг М13 је вирус који инфицира и размножава се унутра Е Цоли. Геном бактерије М13 бактериофага је малих димензија, око 6,7 кб. То је једноланчани, кружни и позитивни ДНК. Овај вирус посебно заразује Е Цоли бактерија кроз Ф пилус. Једном када уђе у ссДНА у бактерију, она синтетише њен комплементарни ланац и постаје дсДНА или репликативни облик (РФ) М13. РФ се може понашати попут плазмида у организму домаћина. ДсДНА се реплицира унутар Е Цоли и производи ссДНА која носи нове фаге. Ови нови фагови се непрестано ослобађају из Е Цоли без убијања ћелије домаћина. Међутим, инфекција успорава раст Е Цоли. дсДНА се може екстраховати из бактеријских ћелија и користити као вектори у клонирању ДНК. Познати су као фазни вектори М13. Њима се лако може манипулирати и користити се слично као плазмидни вектори.
Инхерентна способност инфекције ових М13 фага служи као добра квалификација за употребу као вектора у клонирању гена. Када се М13 развија у вектор, у његов геном треба уградити неколико елемената. Они су ген за протеин лац репрессор (лац И), оперативно проксимални регион лац З ген, лац промотор и вишеструко клонирајуће место (полилинкер). Када се дсДНА М13 користи као вектори, она се може третирати као вектор плазмида. Међутим, употреба ссДНА М13 има предности у секвенцирању ДНК и мутагенези усмереној на место.
Пошто вектор М13 фаг носи више места клонирања унутра лацЗ региона, рекомбиновани вектори могу се лако идентификовати скринингом плаве / беле колоније на агар плочама које садрже ИПТГ и Кс-Гал. Плави плакови произведени на плочама не садрже рекомбиноване фагове. Због тога се у сврху клонирања могу одабрати фаги са уметцима.
Слика 02: Бактериофаг М13
ИАЦ вс М13 Пхаге Вецтор | |
ИАЦ је генетски инжењерски хромозом који има способност да носи велики сегмент стране ДНК и да се реплицира унутар ћелија квасца.. | М13 вектор фага је вирусни вектор развијен бактериофагом М13 који се користи за уметање страних ДНК у Е Цоли. |
Сврха | |
ИАЦ су дизајнирани за клонирање великих фрагмената геномске ДНК у квас. | М13 везни фаги користе се за уметање страних ДНК у Е Цоли. |
Уметни дужину | |
ИАЦ-ови могу садржавати генске уметке величине мегабазе (1000 кб - 2000 кб). | Величина уметка је око 1500 бпс. |
Конструкција | |
ИАЦ ДНК је тешко очистити нетакнутом и захтева високу концентрацију за генерисање ИАЦ векторског система. | Настаје путем цикличког фотосинтетског ланца електрона. |
Стабилност | |
ИАЦ је нестабилан. | М13 фагови се могу лако екстраховати. |
Величина | |
Ензими су већи молекули. | М13 фаги су стабилни од ИАЦ. |
ИАЦ је вештачки изграђен векторски систем који користи одређени регион хромосома квасца да би убацио велике сегменте генетског материјала у ћелије квасца. Фазни вектор М13 је векторски систем добијен из бактериофага М 13 који користи Е цоли као организам домаћина. Ово је главна разлика између ИАЦ и М13 Пхаге Вецтор. Обе су подједнако корисне у технологији рекомбинантне ДНК и клонирању гена.
Референце:
1. "Вектор." Генетике-белешке - вектор. Н.п., н.д. Веб. 16. маја 2017. хттпс://генетицс-нотес.викиспацес.цом/Вецтор
2. "Квасни вештачки хромозом." Википедиа. Викимедиа Фоундатион, 21. април 2017. Веб. 16. маја 2017. .
Љубазношћу слике:
1. „М13Б“ аутор Ј3Д3 - Властита радна снага (ЦЦ БИ-СА 3.0) преко Цоммонс Викимедиа