Разлика између клонирања и субклонирања

Кључна разлика - Клонирање вс субклонирање
 

Клонирање и субклонирање су молекуларни биолошки поступци који стварају генетски идентичне ћелије или организме који носе ДНК или гене који су од интереса. Клонирање је техника која укључује убацивање заинтересованог гена или ДНК у вектор, репликацију гена у бактерији домаћину и производњу ћелија или организама који су тачне копије генетског састава. Субклонирање је техника која укључује убацивање гена који нас занима, који је већ убачен у вектор, у секундарни вектор, репликацију у бактерији домаћину и производњу генетски идентичних копија ћелија или организама. Кључна разлика између клонирања и субклонирања је у томе, код клонирања, интересни ген, једном везан у вектор, наставља процес клонирања, док се у субклонирању већ клонирани интересни ген одваја од матичног вектора и поново убацује у вектор реципијента и наставља процес.

САДРЖАЈ
1. Преглед и кључне разлике
2. Шта је клонирање
3. Шта је субклонирање
4. Упоредна упоредба - Клонирање вс субклонирање
5. Резиме

Шта је клонирање?

Клонирање је поступак који ствара генетски идентичне организме или ћелије. У природи се клонирање дешава путем асексуалне репродукције. Када нема генетске рекомбинације или промене, ћерке ћелије добијају исту генетску слику родитеља. Прокариотски и еукариотски организми стварају клонове бинарном цепљењем, пупољком, митозом итд. У молекуларној биологији гени за клонирање или одређени фрагменти ДНК су популарна метода за проучавање структуре и функције тог одређеног одсека ДНК.

Главни циљ молекуларног клонирања јесте да се направе милиони копија генетски идентичних ћелија или организама који носе фрагмент ДНК који нас занима (углавном гени). Ствара организме са тачним генетским копијама другог. Првенствено, специфични гени су клонирани у молекуларним студијама ради добијања структуралних и функционалних информација и за секвенцирање ДНК. Такође, за производњу специфичних протеина или производа у великом обиму, клонирање се широко користи.

Поступак затварања

Основни кораци поступка клонирања су следећи.

1. Идентификација и изолација гена који нас занима. (Амплификација гена од интереса за ПЦР).
2. Рестриктивна пробава гена од интереса (Рестрицтион ендонуклеасе смањио ген).
3. Рестриктивно варење векторске ДНК. (Векторски ДНК је такође исечен коришћењем исте рестрикцијске ендонуклеазе).
4. Уметање гена у вектор и формирање рекомбинантног молекула.
5. Трансформација рекомбинантног вектора у бактерију домаћина.
6. Изолација и идентификација трансформисаних бактерија (плазмидни вектор треба да садржи ген који се може одабрати, најчешће ген за резистенцију на антибиотике на скрининг трансформисаних бактерија).
7. Експресија рекомбинантних гена у домаћину.

Слика_01: Поступак клонирања

Шта је субклонирање?

Субклонирање је поступак премештања гена од интереса са једног вектора на други вектор да би се видела експресија гена за добијање жељене функционалности гена. У овој методи су укључена два вектора; наиме, надређени и одредишни вектор. Клонирани умеци се премештају поново у други вектор у субклонирању. Циљ преноса гена са првог вектора на други је добијање нечега што први вектор не би могао учинити или одвајање гена унутар већ клонираног фрагмента ДНК и експресије самог. У овом поступку се користе рестриктивни ензими на почетку.

Поступак субклонирања

Основни кораци субклонирања су сљедећи.

1. Уз помоћ рестрикционих ендонуклеаза, одвајање ДНК од интереса у донорском плазмиду (родитељском вектору).
2. Појачавање ДНК од интереса користећи ПЦР.
3. Пречишћавање ПЦР производа (ДНК од интереса) гел електрофорезом.
4. Отварање пријемног плазмида истим рестрикцијским ендонуклеазама које се користе за одвајање ДНК од интереса за матични плазмид.
5. Лигација ДНК од интереса (гена) у реципијентни плазмид да би се створио субклонирани плазмид.
6. Трансформација субклонираног вектора у компетентну бактерију домаћина.
7. Сцреенинг трансформисаних ћелија.
8. Пречишћавање плазмидне ДНК и коришћење за ДНК секвенцирање или експресију гена за добијање жељених производа.

Субклонирање се врши у случајевима изолације једног гена из клониране групе гена или када се ген који занима мора да се пренесе у користан плазмид да би се видела тачна функција гена који нас занима.

Слика_02: Поступак субклонирања

Која је разлика између клонирања и субклонирања?

Клонирање вс субклонирање
Клонирање је поступак који ствара генетски идентичне организме или ћелије.	Субклонирање је поступак премештања гена од интереса са једног вектора на други вектор да би се видела експресија гена за добијање жељене функционалности гена.
Процес
Одвојите ДНК који занима од организма и једном га убаците у вектор и клонирате	Већ клонирана ДНК одвојена је од првог вектора и убачена у други вектор и клонирана.
Уметните покрет преко вектора
Не помера уметке (ДНК од интереса) са једног вектора на други.	Преместите уметке са надређеног на одредишни вектор.

Преглед - Клонирање вс субклонирање

Клонирањем се стварају генетски идентичне ћелије или организми са убаченим геном или ДНК од интереса. Настаје одвајањем и убацивањем ДНК од интереса у вектор и експресију у бактерији домаћину. Субклонирање дели сличне кораке са клонирањем. Међутим, у субклонирању, већ клонирани фрагмент ДНК (ген који вас занима) је убачен у вектор и трансформисан у бактерију домаћина. То је кључна разлика између клонирања и субклонирања.

Референце

1. Лодисх, Харвеи. „Клонирање ДНК векторима плазмида“. Молекуларна ћелијска биологија. 4. издање Америчка национална медицинска библиотека, 01. јануара 1970. Веб. 05. мар. 2017
2. "Субклонирање." Википедиа. Викимедијина фондација, 14. фебруара 2017. Веб. 06. мар. 2017
3. "Субклонирање." Субклонирање | Чланци са отвореним приступом | Часописи са отвореним приступом | Зборник са конференције | Уредници | Аутори | Рецензенти | научни догађаји. Н.п., н.д. Веб. 06. мар. 2017
4. Вацкерхаге, Хеннинг. „Како субклонирати.“ Како субклонирати. Н.п., 01. јануара 1970. Веб. 06. мар. 2017

Љубазношћу слика

1. Поступак молекуларног клонирања - ЦНКС ОпенСтак [ЦЦ БИ 4.0], преко Викимедиа Цоммонс
2. Поступак субклонирања - Аутор оригиналног учитавача био је Такометер на енглеској Википедији (пребачен са ен.википедиа у Цоммонс.) [ЦЦ БИ 2.5], виа Викимедиа Цоммонс