Разлика између ГФП и ЕГФП

Тхе кључна разлика између ГФП-а и ЕГФП-а је да ГФП је протеин дивљег типа који је уграђен у молекуларно клонирање ћелија које нису сисари, док је ЕГФП побољшани или конструисани тип ГФП-а који се може користити на ћелијама сисара.

Молекуларно клонирање је напредна техника коју научници неизмерно користе у експресији протеина помоћу рекомбинантне технологије. У технологији рекомбинантне ДНК, неопходно је да се рекомбинантни вектор успешно трансформише у организам домаћин. Стога би се током процеса трансформације требало идентификовати и потврдити да ли је ген који се занима претворен или не у домаћина. Да би то проценили, молекуларни биолози усвајају неколико техника. Од тих техника, један је репортерски ген. Ови репортерски гени делују као маркери за бирање исправних трансформатора. Дакле, зелени флуоресцентни протеин (ГФП) и појачани зелени флуоресцентни протеин (ЕГФП) су два репортерска протеина која се користе у молекуларном клонирању.

САДРЖАЈ

1. Преглед и кључне разлике
2. Шта је ГФП
3. Шта је ЕГФП
4. Сличности између ГФП-а и ЕГФП-а
5. Упоредна упоредба - ГФП вс ЕГФП у табеларном облику
6. Резиме

Шта је ГФП?

ГФП је дивљи тип протеина који садржи 238 аминокиселинских остатака и неколико селективних региона аминокиселинских секвенци које га разликују од осталих флуоресцентних протеина. Поред тога, овај дивљи протеин је првобитно био изолиран од Аекуореа Вицториа; врста медузе. Међутим, у природним појавама, медузе су могле да произведу флуоресценцију зелене боје као одговор на одређене подражаје.

Раније је овај концепт изненадио научнике, па су одлучили да га користе на својим рекомбинантним ДНК технологијама. Сходно томе, научници су користили овај мутирани облик дивљег типа као репортерски ген у својим студијама експресије гена. Дивљи ген гена ГФП је способан да производи протеин који даје флуоресценцију на собној температури или под УВ светлошћу. Стога се, када се убаци у трансформаторе, изражава и ствара флуоресценцију. Ако флуоресценција настане након процеса трансформације, то потврђује успех процеса трансформације. Једноставним речима, емисија флуоресценције сигнализира успешну трансформацију вектора који носи ген који занима у домаћин.

Слика 01: ГФП

Из тог разлога, ГФП делује као ин виво маркер експресије гена. Тренутно се технике генетског инжењеринга користе у производњи ГФП-а. Такође, доступне су многе побољшане верзије ГФП-а, као што је ЕГФП. Дакле, ово омогућава ефикасну употребу ГФП-а у студијама молекуларног клонирања и експресије гена.

Шта је ЕГФП?

Појачани зелени флуоресцентни протеин или ЕГФП је побољшана верзија ГФП-а. Једноставним речима, ЕГФП можемо дефинисати као дизајнирану верзију дивљих врста ГФП-а. Када дивљи тип гена ГФП-а мутира, он производи благотворне ефекте. Дакле, мутирани ген ГФП-а омогућава експресију нових карактера, и као резултат тога можемо произвести побољшани ГФП са побољшаним карактеристикама. Надаље, можемо успјешно увести мутације у дивљи тип ГФП гена зрачењем или хемијским методама. Ови мутирани гени тада производе ЕГФП, који има корисније карактеристике.

Слика 02: ЕГФП

Побољшане карактеристике ЕГФП-а су следеће;

• Способан је да емитује јаче флуоресцентне сигнале.
• Има високу осетљивост.
• Може се користити на сисарима, уместо прокариота и других еукариота нижег нивоа.
• Такође, обезбеђује повећану чистоћу производа.

Због тога је у поређењу са ГФП-ом пожељни избор за студије експресије гена ЕГФП. Међутим, производ је скупљи у односу на ГФП.

Које су сличности између ГФП-а и ЕГФП-а?

• ГФП и ЕГФП су два протеина која имају могућност емитовања зелене боје
• Због тога, обоје делују као репортерски протеини у студијама експресије гена.
• Такође је могуће и синтетизовати коришћењем рекомбинантне ДНК технологије.
• Штавише, лако је даље мутирати ове две врсте како би се синтетизовали побољшани облици.

Која је разлика између ГФП-а и ЕГФП-а?

Репортерски ген је ген који се повезује са интересним геном за рекомбинантну ДНК технологију. То сигнализира успешну трансформацију рекомбинантног вектора у домаћина. Овде су ГФП и ЕГФП две врсте зелених флоресцентних протеина који делују као репортерски протеини. Међутим, кључна разлика између ГФП и ЕГФП је та што је ГФП дивљег типа док је ЕГФП дизајнирана верзија ГФП-а. Поред тога, ЕГФП има корисније карактеристике од ГФП-а. На пример, ЕГФП производи јачу флуоресцентну светлост и осетљивији је од ГФП. Друга разлика између ГФП и ЕГФП су системи у којима их можемо користити. Системи који нису сисари користе ГФП док сисарски системи користе ЕГФП.

Подаци у наставку приказују разлику између ГФП и ЕГФП у табеларном облику.

Преглед - ГФП вс ЕГФП

ГФП и ЕГФП су репортерски протеини у студијама молекуларног клонирања и експресије гена. ГФП је дивљи тип протеина, који је зелени флуоресцентни протеин. Протеин је у почетку био изолиран од медузе Аекуореа вицториа. Супротно томе, ЕФГП је побољшани облик протеина ГФП. То је мутант дивљег типа са побољшаним карактеристикама. Дакле, ЕФГП има већу снагу сигнала и већу осетљивост. Стога га можемо користити на сисарима. Супротно томе, употреба ГФП-а углавном је само на векторима који нису сисари. Ово је разлика између ГФП-а и ЕГФП-а.

Референце:

1.Цинели, РА и др. „Појачани зелени флуоресцентни протеин као алат за анализу динамике и локализације протеина: Студија локалне флуоресценције на нивоу једно-молекула“. Фотохемија и фотобиологија., Америчка национална медицинска библиотека, јун 2000. Доступно овде  
2. „ПДБ101: Молекула месеца: Зелени флуоресцентни протеин (ГФП).“ РЦСБ: ПДБ-101. Доступно овде

Љубазношћу слике:

1. ”ГФП флуоресцентни протеински филм” Ерин Род - Властито дело, (ЦЦ БИ-СА 4.0) преко Цоммонс Викимедиа 
2. ”ЦА2 амиго2 еГФП миш” Дудек, Серена; Цуруана, Доуглас; Царстенс, Келли - Властита дела (ЦЦ БИ-СА 3.0) преко Цоммонс Викимедиа