Прскање је важна техника за откривање специфичних секвенци ДНК, РНА и протеина из њихових мешавина у молекуларној биологији. Изводи се помоћу мембране која се зове блот. Постоје различите технике брисања попут северног, јужног и западног блотирања. Одабир одговарајуће мембране за процес брисања треба пажљиво да се спречи неспецифично везивање и погрешна детекција. Нитроцелулоза, најлон и ПВДФ су најчешће коришћене мембране у техникама брисања. Имају различите карактеристике. Кључна разлика између нитроцелулозе и најлонске мембране је та мембране нитроцелулозе имају висок потенцијал имобилизације протеина док најлонске мембране имају висок потенцијал имобилизације нуклеинских киселина. Међутим, обе врсте мембрана се често користе у техникама брисања.
САДРЖАЈ
1. Преглед и кључне разлике
2. Шта је нитроцелулозна мембрана
3. Шта је најлонска мембрана
4. Упоредна упоредба -Нитроцелулоза и Најлонска мембрана
5. Резиме
Нитроцелулозна мембрана је често коришћени мембрански филтер у техникама нуклеинске киселине и простирања протеина. Има висок потенцијал везивања протеина. Стога се нитроцелулозне мембране широко користе у техници западног упијања. Нитроцелулозне мембране су компатибилне са свим техникама хибридизације и показују супериорне капацитете везивања без сметњи. Нитроцелулозне мембране су природно хидрофилне природе. Они остварују хидрофилну интеракцију са молекулима и ефикасно их имобилишу на мембрану. Комерцијалне нитроцелулозне мембране доступне су у две величине пора: 0,45 и 0,2 µм.
Слика 01: Нитроцелулозна мембрана која се користи у Вестерн блотирању
Најлонска мембрана је друга врста комерцијалне мембране која се користи у техникама брисања. Алтернативно се користи са нитроцелулозним мембранама за јужно и северно подмазивање. Најлонске мембране су идеалне за јужну мрљу од нитроцелулозе због високог афинитета ка везању са ДНК. Због неколико јединствених карактеристика најлонских мембрана, истраживачи најчешће користе најлонске мембране за јужно и северно брисање уместо преко нитроцелулозне мембране. Најлонске мембране се такође препоручују за скидање и поништавање, за разлику од нитроцелулозе.
Слика 02: Најлонска мембрана која се користи за јужно подмазивање
Нитроцелулоза вс Најлонска мембрана | |
Мембране нитроцелулозе су ломљиве. | Најлонске мембране су мање ломљиве. |
Руковање | |
Тешко су са њима. | Једноставни су за руковање. |
Укор | |
Неподржане нитроцелулозне мембране тешко је оповргнути. | Сметање је једноставно уз помоћ најлонских мембрана. |
Компатибилност са разним условима складиштења | |
Нитроцелулозне мембране имају мању снагу да издрже различите услове складиштења. | Најлонске мембране одговарају снажније на различите услове чувања. |
Употреба | |
Потребно је претходно влажење. | За најлонске мембране није потребно претходно подвлачење. |
Хидрофилна природа | |
Нитроцелулозне мембране су хидрофилне природе, али су мање хидрофилне од најлонских мембрана. | Они су високо хидрофилне природе. |
Потенцијал имобилизације | |
Мембране нитроцелулозе имају мањи афинитет према нуклеинским киселинама. Али има висок афинитет према протеинима. | Најлонске мембране имају висок потенцијал везања са нуклеинским киселинама него мембране нитроцелулозе. |
Нитроцелулозне и најлонске мембране су посебни листови који се користе у техници брисања како би се репродуцирала шаре на гелу. Омогућавају могућност детекције специфичне секвенце или протеина из смеша имобилизацијом на мембрани. Једном када се молекули имобилизирају на мембрани, они се могу користити као супстрат за анализу хибридизације са обележеним сондама. Нитроцелулозна мембрана се обично користи за детекцију протеина у западној блот-техници због високог афинитета везивања са протеинима. Најлонске мембране се често користе за јужно и северно размазивање. Ово је разлика између нитроцелулозе и најлонске мембране.
Референце:
1. Хаиес, П. Ц., Ц. Р. Волф и Ј. Д. Хаиес. "Технике брисања за проучавање ДНК, РНК и протеина." БМЈ: Бритисх Медицал Јоурнал. Америчка национална медицинска библиотека, 14. октобар 1989. Веб. 07. април 2017
2. Махмоод, Тахрин и Пинг-Цханг Ианг. "Вестерн Блот: техника, теорија и пуцање проблема." Нортх Америцан Јоурнал оф Медицал Сциенцес. Медкнов Публицатионс & Медиа Пвт Лтд, септембар 2012. Веб. 07. април 2017
Љубазношћу слике:
1. „Вестерн блот трансфер“ аутор Бенсаццоунт-а на енглеској Википедији (ЦЦ БИ 3.0) преко Цоммонс Викимедиа