Разлика између нитроцелулозе и ПВДФ

Кључна разлика - Нитроцелулоза и ПВДФ
 

Вестерн блоттинг је метода која омогућава детекцију и квантификацију специфичних протеина из узорка протеина. Поузданост технике зависи од избора исправне мембране за апсорпцију протеина из гела. Постоје различите врсте микропорозних мембрана. Нитроцелулозне и ПВДФ мембране су две такве мембране које преферирају истраживачи због својих посебних својстава у односу на остале врсте мембрана. Избор између нитроцелулозе или ПВДФ-а је такође још један изазов у ​​западном флету. И нитроцелулоза и ПВДФ имају високу способност апсорпције протеина. Кључна разлика између нитроцелулозе и ПВДФ мембране је та мембране нитроцелулозе немају способност уклањања антитела и поновну употребу мембране за репротело антитела док ПВДФ мембране имају способност скидања и поновне употребе.

САДРЖАЈ
1. Преглед и кључне разлике
2. Шта је нитроцелулоза
3. Шта је ПВДФ
4. Упоредна упоредба - Нитроцелулоза и ПВДФ
5. Резиме

Шта је нитроцелулоза?

Нитроцелулоза је полимер произведен третирањем целулозе азотном киселином и користи се за прављење микропорозних мембрана у молекуларној биологији, посебно за технике блотирања попут јужног, северног и западног блотирања. Величине поре нитроцелулозних мембрана крећу се од 3 до 20 ум. Микропорозне мембране нитроцелулозе олакшавају откривање имунохемијске реакције која се дешава на површини мембране. Због тога се нитроцелулозне мембране често користе за имобилизацију протеина и детекцију специфичних протеина у западном блоту. Мембране нитроцелулозе могу такође имобилизирати гликопротеине и нуклеинске киселине.

Нитроцелулозне мембране су пожељне у испитивањима бочног протока због неколико карактеристика. Мембране нитроцелулозе апсорбују протеине у великој концентрацији. Растварач који се користи за влажење мембране не смањује апсорпцију протеина нитроцелулозне мембране. Мембране нитроцелулозе могу се лако пресећи до жељене величине гела и пребацити протеине из гела у мембрану електричним или капиларним преносом. Нитроцелулоза омогућава бржи проток протеина кроз мембрану са великим потенцијалом везивања. Нитроцелулоза показује побољшану снагу руковања. Још један посебан атрибут нитроцелулозне мембране је да се он може лако лепити са лепковима отпорним на воду који нису растварач, на различите пластичне подлоге.

Слика 01: Нитроцелулозна мембрана за Вестерн блот

Шта је ПВДФ?

Поливинилиден дифлуорид (ПВДФ) је флуорополимер произведен полимеризацијом винилиден дифлуорида и има високу способност имобилизације протеина. Због тога се микропорозне мембране направљене од ПВДФ-а користе у техници западног блотирања за анализу специфичних протеина из смеша протеина. ПВДФ мембране се такође могу користити за анализу аминокиселина и секвенцирање протеина. Најважнија карактеристика ПВДФ мембране преко нитроцелулозне мембране је та што се она могу лако уклонити антитела и поново користити за следеће сонде антитела.

Мембране ПВДФ су дебље од нитроцелулозних мембрана; стога су отпорнији на оштећења током поновне употребе. Мембране ПВДФ су високо хидрофобне. Због тога се пре употребе морају намочити у метанолу или изопропанолу.

Која је разлика између нитроцелулозе и ПВДФ?

Нитроцелулоза вс ПВДФ
Нитроцелулоза је полимер састављен од целулозе.	ПВДФ је флуорополимер произведен полимеризацијом винилиден дифлуорида.
Величина поре мембране
Типичне величине пора су 0,1, 0,2 или 0,45μ	Типичне величине пора су 0,1, 0,2 или 0,45 μм
Капацитет везивања протеина
Нитроцелулоза има способност везивања за протеине од 80 до 100 µг / цм2.	ПВДФ има капацитет везања протеина од 170 до 200 µг / цм2.
Осетљивост
Ово има малу осетљивост у поређењу са ПВДФ.	Ово има велику осетљивост.
Детекција слабо експримираних протеина
Пошто је осетљивост на нитроцелулозне мембране мала, није погодна за детекцију слабо експримираних протеина.	Ово је погодније за детекцију слабо експримираних протеина због велике осетљивости.
Позадинску буку
Ово има нижу позадинску буку	Ово има већу позадинску буку.
Интеракције са протеинима
Молекули протеина везују се за нитроцелулозне мембране помоћу хидрофобних интеракција.	Протеини се везују за ПВДФ мембране кроз хидрофобне и диполне интеракције.
Природа мембране
Нитроцелулоза је крхка и крхка. Међутим, доступне су верзије нитроцелулозе и отпорне су на њих.	ПВДФ је трајнији и има већу хемијску отпорност.
Способност уклањања и поновне употребе
Нитроцелулоза може имати потешкоћа у скидању и поништавању без губитка сигнала.	ПВДФ је идеалан за испитивање и редослијед апликација.
Погодност
Нитроцелулоза је идеална за откривање протеина мале молекулске масе.	ПВДФ је погоднији за откривање протеина веће молекулске тежине.
Остале употребе
Нитроцелулоза се може користити за анализу нуклеинске киселине и брисање тачака / утора.	ПВДФ се може користити за секвенцирање протеина и системе испитивања чврстих фаза.
Трошак
Ово је јефтиније од ПВДФ мембрана.	Ово је скупље од нитроцелулозних мембрана.
Потреба за предвлажењем
Мембране нитроцелулозе не захтевају претходно натапање метанолом	За ПВДФ мембране је потребно претходно наношење метанолом.

Преглед - Нитроцелулоза и ПВДФ

Нитроцелулозне мембране су биле прве мембране које су комерцијално коришћене за испитивање бочног протока. Имају висок капацитет апсорпције протеина. Због тога се нитроцелулозне мембране користе у западном блотингу. ПВДФ је друга врста мембране која се користи код Вестерн блот-а и такође има високу способност апсорпције протеина. Обе врсте се користе у Вестерн блот-у за анализу протеина. Међутим, ПВДФ мембране имају више посебних атрибута, што их чини погоднијим од нитроцелулозних мембрана за западно певање. Но, нитроцелулозне мембране су погодније за детекцију протеина ниске молекуларне тежине, а ПВДФ мембране су погодније за детекцију високо молекулских тежинских протеина. Ово је разлика између нитроцелулозне и ПВДФ мембране.

Љубазношћу слике:
1. "Вестерн блот трансфер" аутор Бенсаццоунт на енглеској Википедији (ЦЦ БИ 3.0) преко Цоммонс Викимедиа

Референце:
1.Лукуе-Гарциа, Јосе Л., Ге Зхоу, Тунг-Тиен Сун и Тхомас А. Неуберт. „Употреба нитроцелулозних мембрана за карактеризацију протеина ласерском десорпцијом / јонизационом масном спектрометријом помоћу матричне помоћи“. Аналитичка хемија. Америчка национална медицинска библиотека, 15. јула 2006. Веб. 28. март 2017
2. "Молекуларни маркери и биљна биотехнологија." Гоогле књиге. Н.п., н.д. Веб. 28. март 2017
3.Мондаи, 8. априла 2013. Твеет. "Чаробњаци у мембрани: мудро бирајте за најбоље резултате резултата западног блота." Биоцомпаре. Н.п., 08. апр. 2013. Веб. 28. март 2017