Разлика између ПЦР и ПЦР у реалном времену

ПЦР вс ПЦР у реалном времену

Линијска реакција ПЦР или полимераза револуционарно је откриће у модерној молекуларној биологији, коју је хемичар Кари Муллис први пут развио 1983. Омогућава да се за анализу појача један низ у сложеној ДНК. Основна идеја ПЦР-а је да су два прајмера, који су комплементарни супротним ланцима ДНК секвенце, орјентисани једни према другима; прајмери ​​производе комплементарне нити, а свака садржи други прајмер. Дакле, резултат је велика количина секвенце која одговара ДНК која лежи између два прајмера. Ензим ДНК полимераза се користи за продужење прајмера у ПЦР. ДНК полимераза је термостабилни ензим и има способност преживљавања на високим температурама (од 94 до 95 ° Ц) која се користи за денатурацију шаблона ДНК.

ПЦР укључује три корака, наиме, поновљене рунде денатурације, жарење прајмера и синтезу ДНК. За обављање ове реакције користи се термоцикличка машина тако да се она може програмирати тако да брзо и тачно мења температуре. Примене ПЦР-а су криминалистичка истрага, отисак ДНК, откривање патогена и анализа ДНК раних људских врста.

Шта је конвенционална ПЦР?

Постоје три главне фазе конвенционалног ПЦР, наиме; Стадиј амплификације ДНК, одвајање ПЦР и детекција производа. Раздвајање ДНК сегмената обично се врши електрофорезом агарозног гела. Производи се затим обоје са етхеидуим бромидом. Коначно, откривање се постиже визуелизацијом трака на гелове под УВ светлошћу. Стога, коначни резултати конвенционалног ПЦР-а нису изражени као бројеви. Обично ПЦР може открити само један параметар.

Шта је ПЦР у реалном времену?

ПЦР у реалном времену може открити појачавање производа јер се производи синтетишу. Развојем технологије ПЦР је постао веома популарна техника, посебно за детекцију и идентификацију бактерија у храни. ПЦР у реалном времену користи флоресцентни систем боја и термоциклер опремљен флуоресцентном детекцијом.

Која је разлика између конвенционалне ПЦР и ПЦР у стварном времену?

• Конвенционална ПЦР захтева више времена јер користи гел електрофорезу за анализу појачаних ПЦР производа. Супротно томе, ПЦР у реалном времену захтева мање времена јер може открити појачања током раних фаза реакције.

• ПЦР у реалном времену прикупља податке у фази експоненцијалног раста ПЦР док традиционални ПЦР прикупља податке у Крајњој тачки реакције.

• Резултати крајње тачке конвенционалног ПЦР-а можда нису баш прецизни, али резултати ПЦР-а у стварном времену су врло прецизни.

• ПЦР у реалном времену је осетљивији од класичног ПЦР.

• Конвенционални ПЦР има веома лошу резолуцију, док ПЦР у реалном времену може открити врло мало промена услед високе резолуције.

• Детекција крајње тачке конвенционалног ПЦР има кратак динамички опсег док детекција ПЦР у реалном времену има широк динамички опсег.

• За разлику од класичног ПЦР-а, аутоматизоване технике детекције налазе се у ПЦР-у у стварном времену.

• Конвенционални ПЦР је веома софистициран и радно интензивнији од ПЦР-а у стварном времену.

• За разлику од ПЦР-а у стварном времену, конвенционални ПЦР не може разликовати мртве и живе бактерије.

• ПЦР у реалном времену користи флуоресцентни систем боја за детекцију производа док конвенционални ПЦР користи етидијум бромид и УВ светлост за визуелизацију трака у медијума агарозе гела.