Разлика између странице СДС и Вестерн Блот-а

Кључна разлика - СДС страница против западног блота
 

Вестерн блоттинг је техника која детектује одређени протеин из узорка протеина. Ова техника се изводи кроз неколико кључних корака: гел електрофореза, блотирање и хибридизација. Електрофореза натријум додецил сулфата полиакриламид гела (СДС Паге) је врста гел електрофорезе која се користи за одвајање протеина према њиховој величини (молекуларна тежина). Вестерн блот је посебан лист мембране, који се користи за преношење истог узорка протеина у СДС страници. Кључна разлика између СДС-ове странице и западног блота је у томе СДС Паге омогућава одвајање протеина у смеши док Вестерн блот омогућава детекцију и квантификацију специфичног протеина из смеше. Обе су корисне у студијама анализе протеина.

САДРЖАЈ
1. Преглед и кључне разлике
2. Шта је страница СДС
3. Шта је Вестерн Блот
4. Упоредна упоредба - Страница СДС-а према западном блоту
5. Резиме

Шта је страница СДС?

СДС Паге је гел електрофореза која се користи за одвајање протеина. Најчешће се користи у биохемији, генетици, форензици и молекуларној биологији. Једном када се протеини екстрахирају из узорка, они се стављају на гел састављен од СДС-а и полиакриламида. СДС је анионски детерџент који се користи за линеаризовање протеина (денатурајући протеини) и давање негативног набоја линеаризованим протеинима пропорционалним њиховој молекулској маси. Полиакриламид постаје чврст ослонац гела. Денатурирани протеини који су негативно набијени мигрирају према позитивном крају апарата кроз гел. Према величини протеина, брзине мигрирања разликују се међу протеинима и долази до одвајања. Стога је СДС страница корисна за одвајање појединачних протеина на основу њихове величине.

Припрема полиакриламидног гела за фракционисање протеина је пресудан корак у СДС. Исправна концентрација полиакриламида и врста коришћеног умрежавајућег средства снажно утичу на физичка својства гела, што чини стварно раздвајање различитих протеина. Величине пора гела треба правилно управљати за ефикасно одвајање. Међутим, СДС Паге се сматра техником раздвајања протеина високе резолуције.

СДС Паге техника има велико ограничење у анализи протеина. Пошто СДС денатура протеине пре одвајања, не дозвољава откривање ензимске активности, интеракције везивања протеина, протеинских кофактора итд..

Слика 01: Страница СДС

Шта је Вестерн Блот?

Вестерн блоттинг техника омогућава детекцију специфичног протеина из протеинске мешавине и мерење количине и молекуларне тежине протеина. Вестерн блот је мембрана која се користи током поступка накупљања за добијање зрцалне слике протеинских образаца у СДС-полиакриламидном гелу. Мембрана која се користи за западњавање блотином углавном се састоји од нитроцелулозе или поливинилилиден дифлуорида (ПВДФ). Мембрана са пренесеним протеином може се користити за идентификовање жељеног протеина. За детекцију жељеног протеина хибридизацијом су потребна високо квалитетна антитела. Антитело се везује за свој специфични антиген и открива присуство жељеног антигена који је протеин.

Преношење протеина из СДС-овог полиакриламидног гела у западни блот врши се електроплатирањем. То је ефикасна и брза метода која проузрокује електрофорезу протеина из гела и прелазе на нитроцелулозну мембрану (Вестерн блот).

Слика 02: Вестерн Блот

Која је разлика између СДС Паге и Вестерн Блот-а?

СДС Паге вс Вестерн Блот
СДС Паге је техника електрофорезе у облику гела.	Вестерн блот је техника која се изводи на мембрани да би се открио одређени протеин из смеше.
Употреба
СДС страница омогућава одвајање протеина према њиховој величини.	Вестерн блот омогућава пренос протеина на СДС страни гела без промене његовог обрасца и омогућава хибридизацију са специфичним антителима.
Недостаци
Денатурација протеина, скупи трошкови и присуство хемијских неуротоксина су недостаци ове технике.	Ова техника захтева много времена и захтева добро искусне личне и специфичне контролисане услове.

Преглед - СДС Страница против Вестерн Блот-а

СДС страница и Вестерн блот су двије методе укључене у анализу протеина. СДС Паге омогућава лако одвајање протеина на гелу у складу са њиховом молекуларном тежином. Вестерн блот помаже да се потврди присуство и количина одређеног протеина хибридизацијом специфичних антитела. То је разлика између СДС-ове странице и западног блота.

Референце:
1. Бланцхер, Ц. и А. Јонес. „СДС-СТРАНИЦА и технике западног испирања“. Методе у молекуларној медицини. Америчка национална медицинска библиотека, н.д. Веб. 27. март 2017
2. Новаковски, Андрев Б., Виллиам Ј. Вобиг и Давид Х. Петеринг. „Нативе СДС-ПАГЕ: Електрофоретско раздвајање протеина високе резолуције са задржавањем нативних својстава, укључујући и јоне са везаним металима.“ Металломика: интегрисана наука о биометалима. Америчка национална медицинска библиотека, мај 2014. Веб. 27. март 2017.

Љубазношћу слике:
1. „СДС-СТРАНСКА Електрофореза“ аутор Бенсаццоунт-а на енглеској Википедији (ЦЦ БИ 3.0) преко Цоммонс Викимедиа
2. "Вестерн блот 114А" написао Амантхабагдон - сопствени рад (Публиц Домаин) преко Цоммонс Викимедиа